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瑞氏染色的步骤是什么？
瑞氏染色法为了观察细胞的内部结构，识别各种细胞及异常变化，必须对血涂片进行染色。血涂片的各种染色方法大多源自罗氏染色法。赖特染色法是常用的染色方法。【目的】掌握血涂片的染色方法。【原理】将制备好的薄膜涂上分布均匀的血细胞，用复合染料染色。着色的原理包括物理吸附和化学亲和。不同类型的细胞以及同一细胞的不同成分和结构对酸性和碱性染料的结合能力不同。因此，不同类型的细胞被染成不同的颜色，显示出各自的特征。【设备】今天我们的设备是载玻片、载玻片、吸、显微镜。【试剂】1瑞氏染料是由酸性染料曙红E和碱性染料亚甲蓝M|+组成的复合染料。亚甲蓝又称亚甲基蓝，是一种四甲基硫氨酸染料，具有对醌型和邻醌型两种结构。它通常是一种氯化物盐，即氯化亚甲蓝。亚甲蓝很容易被氧化成一、二、三甲硫氨酸等辅助染料，即天青。曙红通常是钠盐。将适量伊红和亚甲蓝溶解在甲醇中，即为赖特染料。甲醇的作用首先溶解亚甲蓝和伊红ME，并将其解离为M+和E+。后两者可以选择性地吸附血细胞中的不同成分，使其着色；二是具有很强的脱水作用。可以固定细胞的形状。当细胞凝固时，蛋白质沉淀成颗粒或网状，增加细胞结构的表面积，改善染料的吸附，增强染色效果。2瑞氏染色液的配制取瑞氏染料10g，甲醇600ml，甘油15ml。操作如下将所有染料放入干净干燥的研钵中，先加入少量甲醇慢慢研磨至少半小时，使染料充分溶解，加入一些甲醇搅拌均匀，然后倒入溶解部分变成洁净的棕色瓶中，加入少许甲醇，将剩余未溶解的染料放入研钵中研磨，研磨数次，直至染料完全溶解，甲醇用完。添加15ml甘油并储存在密封容器中。这就是我们准备的I解决方案。注意新配制的染液呈碱性，染色效果较差。亚甲基蓝在室温下保存一定时间后逐渐转变为天蓝色B，方可使用。这个过程称为染料成熟。放置时间越长，颜色越青，染色效果越好。但瓶口必须密封严实，防止甲醇挥发或氧化成甲酸。也可以在染色液中加入3ml中性甘油，防止甲醇蒸发或氧化，也可以使血细胞染色更清晰，但我们使用的甲醇必须是纯净的。II溶液又称磷酸盐缓冲溶液PH64-68，含磷酸二氢钾03g，磷酸氢二钠02g，加蒸馏水至1000ml。配制后，用磷酸盐溶液校正pH值。如果没有缓冲液，可用新鲜蒸馏水代替。也可以用蒸馏水代替。3染色血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，防止染色时染液溢出。然后将载玻片平放在染色架上，加入3-5滴染料溶液覆盖血涂片。约1分钟后，加入等量或稍多的II溶液，并用吸轻轻混合。制服。漂洗用流水染液染色5-10分钟，等待晾干。结果观察干燥后的血涂片在显微镜下观察。先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。
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