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介绍
在肉鸡养殖中，产气荚膜梭状芽胞杆菌是一种常见的致病菌，由其引起的肠道疾病严重影响肉鸡的生长和健康，本研究的目的是确定百里香酚和香芹酚精油对产气效果的影响。生产。就是评价。产气荚膜梭菌的体外抗菌活性包括最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的测定，探索百里香酚和香芹酚精油对产气荚膜梭菌生长动态的影响，包括生长曲线、生长速率等。
研究表明，百里香酚和香芹酚精油对产气荚膜梭菌具有显着的体外抗菌活性，最低抑制浓度和最低杀菌浓度均表现出抗菌作用。在生长动力学实验中，百里香酚和香芹酚精油表现出对生长速率的抑制作用。产气荚膜梭菌的生长曲线和抑制效果与精油浓度呈正相关。
培养物制备和实验设计
Mysolol、香芹酚和商业EO产品针对一组有益和不良细菌（包括鸡大肠杆菌野生菌株CVCC1553和CVCC1490以及从收集中心获得的鸡产气荚膜梭菌野生菌株）进行了测试。菌株、肠沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和普氏沙门氏菌。
还测试了从培养物保藏中心获得的肠炎链菌现场菌株以及从微生物培养中心获得的嗜酸乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和唾液乳杆菌。
大肠杆菌和沙门氏菌的过夜培养物是通过在37C的Luria-Bertani肉汤中摇动冷冻库存的培养物来新鲜制备的，产气荚膜梭菌的培养物是在熟肉汤中制备的，而乳酸杆菌是在37C下生长的。不可动摇的罗戈萨锋利肉汤。
采用常规肉汤稀释法测定最低抑菌浓度。首先将商业EO产品百里酚和香芹酚溶解在二甲亚砜中作为300mg/mL储备溶液，然后在Mueller-Hinton肉汤中剧烈摇动稀释至6mg/mL。然后制备百里香酚和香芹酚的两倍系列稀释液，以产生6000、3000、1500、750、375、1875、9375和46875g/mL的浓度。
乳酸菌试验采用MRS液体培养基稀释，为避免DMSO本身的抗菌作用，DMSO最终浓度不超过2，然后将新鲜微生物悬液/mL接种到稀释后的液体培养基中。沙门氏菌和沙门氏菌在37C下连续振荡培养过夜，而产气荚膜梭菌和乳杆菌分别在37C下厌氧培养24小时和16小时，不振荡。
每个实验包括阳性生长对照和阴性对照。孵育后，使用分光光度计测量595nm处悬浮液的光密度。将50L每种肉汤稀释液分别接种到适当的琼脂培养基和营养琼脂上。多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂和MRS琼脂。
采用平板法，最低抑菌浓度定义为培养后OD不增加的最低EO或组分浓度，最低灭菌浓度定义为未检出活菌的EO或组分最低浓度。所有分析均一式三份进行。
试验中使用448只1日龄雄性肉鸡，为期28天，按照42析因排列采用随机完全区组设计，将雏鸡分为0个处理组，确定日粮EO补充量，病原体挑战和相互作用。评估。
每个处理由八个重复笔组成。实验中使用的EO是含有25%百里酚和0%香芹酚的市售产品。2004年第21-21天和28-28天期间，鸡只被喂食糊状饲料，并免费提供成品饲料。制作不含抗生素和虫的小麦饲料，以确保获得饲料和水，从而促进产气荚膜梭菌的生长。
产气荚膜梭菌采样和检测
通过聚合酶链式反应鉴定出特定的生物体CVCC2027，它是从鸡NE临床病例中分离出来的A型野外菌株，不携带NetB基因。简而言之，在糖、亚硫酸盐和环丝氨酸琼脂上培养18小时后，将生物体无菌接种到熟肉琼脂中，并在37C厌氧培养过夜。
在第1天和第0天之间每天一次以8立方英尺/mL的浓度口服强饲0.10mL生长活跃的产气荚膜梭菌培养物收集样品（在第21天和28天随机选择）。
第21天和第28天，从回肠和盲肠无菌收集裂解物用于细菌学检查，并储存在-80C。通过经过一些修改的绝对定量实时PCR检测细菌种群，并从200mg裂解液中提取基因组DNA。使用商业试剂盒提取回肠和盲肠，并将提取的DNA保存在-20C直至分析。
从纯培养物中提取的DNA用于制备RT-PCR的标准曲线，并通过常规PCR扩增产生高浓度的目标DNA。引物序列是在之前的研究中设计的，基于针对大肠杆菌的16srDNA序列。包括大肠杆菌、Alveahafnia和志贺氏菌。
使用大肠杆菌感受态细胞DH5构建质粒标准品，使用PCR纯化试剂盒纯化PCR产物，并使用TA克隆试剂盒克隆到pCR21中，使用NanodropND纯化纯化的含有插入片段的细胞-1000。使用量化。分光光度法片段化质粒。
在每个96孔板中制备7500倍连续稀释系列的质粒DNA，以生成标准曲线。根据优化方法，使用荧光检测系统，以来自回肠和盲肠样本的基因组DNA作为绝对定量RT-PCR的模板。PCR方案。RT-PCR引物与常规PCR扩增引物相同，结果以对数表示，以证明每克肠道内容物的基因拷贝数，以获得正态分布。
第21天，从小肠收集新鲜肠内容物，添加两种6mol/L硫酸以停止发酵。
与饲喂基础日粮的禽类相比，第60天饲喂120mg/kg和240mg/kgEO的禽类盲肠中的乳酸菌数量较高，相反，盲肠中的细菌和大肠杆菌总数有所减少。第28天，在产气荚膜梭菌激活和膳食EO补充之间没有观察到回肠和盲肠微生物群之间的相互作用，这与EO剂量的增加呈线性关系。
肠道百里香酚和香芹酚浓度随着日粮EO剂量的增加而线性增加，对于饲喂240mg/kgEO的鸡分别达到080和071g/g。这明显高于饲喂60和120mg/kgEO的家禽。
因此
研究结果表明，体外模拟实验表明，百里香酚和香芹酚精油对产气荚膜梭菌生物膜形成有一定的抑制作用，并能降低生物膜的覆盖度和稳定性。这一发现为探索天然植物的应用提供了基础。精油在肉鸡养殖中的应用提供了强有力的支持，同时本研究也为进一步研究精油在肉鸡养殖中的抗菌和预防作用提供了新的思路和方向。
参考
ZumimRommol，家禽中的产气荚膜梭菌对动物和公共卫生的新威胁。
NelloreBarley，“梭菌性肠炎是一个经常被低估的题。”
GreganKouts，“家禽营养中的精油主要作用和作用方式”
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